Штаммы гибридных клеток, продуцирующие моноклональные антитела против рецептора программируемой гибели клеток PD-1 фактора, снижающего иммунитет против онкологических заболеваний.

Целью проекта в 2018 году является получение штаммов микроорганизмов, продуцирующих рекомбинантный PD-1 белок.

В процессе работы использовались методы генетической инженерии, а также иммунологические, биохимические и биотехнологические методы исследования.

Спроектированы две генетические конструкции на основе экспрессионных векторов pET28 и pET32 содержащих ген рецептора PD-1 человека. В условиях de novo синтезирован ген рецептора PD-1. Ген клонирован в экспрессионный плазмиды pET28 и pET32. Получены штамм продуценты E.coli BI21/pET28/PD-1 и E.coli BL21/pET32/PD-1. Штаммы клеток стабильно продуцируют рекомбинантный рецептора PD-1 человека. Молекулярная масс белков 21 и 34 кДа. Концентрация рекомбинантного белка в очищенных препаратах составила – 1 мг/мл. Опубликована одна статья в отечественном научном издании с ненулевым импакт фактором и подана одна заявка на патент. Новизна исследования заключается в штамме продуценте внеклеточного домена рецептора PD-1 человека.

Полученные штаммы микроорганизмов продуцировали внеклекточный домен рецептора PD-1 человека в высоких концентрациях.

Проект на стадии разработки

Эффективность разработки определяется высокими продуктивными характеристиками полученных штамм-продуцент

Медицина

Штамм гибридных клеток, продуцирующие моноклональные антитела против рецептора программируемой гибели клеток PD-1 фактора, снижающего иммунитет против онкологических заболеваний.

Получение штаммов гибридных клеток, продуцирующих моноклональные антитела против внеклеточного домена рецептора PD-1 человека.

Клеточная инженерия, иммунологические, биохимические методы.

Рекомбинантный PD-1 вызывал образование антител до титра 1:25600. Сыворотка иммунизированных мышей не давала перекрестных реакций с гетерогенными белками и реагировала только с белком 21 кДа. Результаты MS-MS спектрометрии совпали аминокислотной последовательностью PD-1 представленные в базе данных NCBI и SwissProt. Получены и исследованы культуральные свойства 4 штаммов гибридных клеток 5B6C9H, 7F5D11G, 8E4D7E, 10E3F5D продуцирующих моноклональные антитела к PD-1. Продуктивность клеток составила 0,5 мг/мл в культуральной жидкости и 16 мг/мл в асцитной жидкости. Отработан метод выделения и очистки моноклональных антител. Опубликована одна статья в журнале с ненулевым импакт фактором, одна статья принята к публикации в журнале индексируемая в базе данных Scopus и подана одна заявка на патент. Новизна исследования заключается в получении штамма гибридных клеток, продуцирующих моноклональные антитела против внеклеточного домена рецептора PD-1 человека.

Полученные штаммы гибридных клеток обладаю высокими продуктивными и выгодными технологическими свойствами.

Проект на стадии разработки.

Эффективность разработки определяется высокими продуктивными характеристиками полученных штаммов гибридных клеток.

Медицина.

Объектом исследования являются штаммы гибридных клеток, продуцирующие моноклональные антитела против рецептора программируемой гибели клеток PD-1, фактора снижающего иммунитет против онкологических заболеваний.

Целью проекта в 2020 году является получение штаммов гибридных клеток, продуцирующих моноклональные антитела против внеклеточного домена рецептора PD-1 человека.

В процессе работы использовались методы гибридомной технологии, а также иммунологические, биохимические и биотехнологические методы исследования.

В результате исследования получены 2 штамма микроорганизмов, продуцирующие рекомбинантный внеклеточный домен рецептора PD-1 человека. Отработаны параметры выделения и очистки рекомбинантного белка. Молекулярная масса белка составила 21 кДа. MS-MS спектрометрия рекомбинантного белка показала полное совпадение с белком PD-1. Получены 5 штамма гибридных клеток H8, A5, E9, C9, A4 продуцирующих моноклональные антитела к PD-1. Определены культуральные и продуктивные свойства полученных гибридных клеток. Константа связывания моноклональных антител против PD-1 составляла от 2х107М-1 до 2х108М-1. Полученные моноклональные антитела относятся к иммуноглобулинам класса. Опубликованы 2 статьи в журнале с ненулевым импакт фактором рекомендованных КОКСОН, 2 статьи в журнале индексируемом в базе данных Scopus. Получен патент на изобретение и подана одна заявка на патент. Новизна результатов: в Республике Казахстан получены моноклональные антитела против PD-1 белка Т-лимфоцитов человека и исследованы их иммунохимические и биолгические свойства.

Полученные моноклональные антитела против PD-1 человека обладают высокой чувствительностью, специфичностью, аффинностью и активностью.

Не внедрен

Эффективность разработки определяется высокими иммунохимическими и биологическими свойствами моноклональных антител.

Медицина