Штаммы гибридных клеток, продуцирующих моноклональные антитела против GPR161 рецептора клеток маркера метастазирования рака молочной железы.

Получение штаммов микроорганизмов, продуцирующих рекомбинантные внеклеточные петли рецептора GPR161 человека.

Генетическая инженерия, иммунологические, биохимические и биотехнологические методы.

Спроектировано 6 генетических конструкции несущих гены 3-х внеклеточных петель рецептора GPR161 человека. Синтезированы гены петель TM helix 2-3 длинной 265 п.о., TM helix 4-5 – 295 п.о. и TM helix 6-7 – 266 п.о. Гены клонированы в плазмиды pET28 и pET32. Плазмиды pET28/GPR161.1, pET28/GPR161.2, pET28/GPR161.3, pET32/GPR161.1, pET32/GPR161.2 и pET32/GPR161.3 наработаны в концентрация от 208 до 238 нг/мкл, объем 200 мкл. Получены штаммы микроорганизмов E.coli BL21/pET28/GPR161.1, BL21/pET28/GPR161.2, BL21/pET28/GPR161.3 продуцирующие рекомбинантные белки и препараты фрагментов рецептора с молекулярной массой 13, 14 и 13 кДа. Концентрация белков – 500 мкг/мл. Опубликована одна статья в отечественном научном издании с ненулевым импакт фактором и подана одна заявка на патент. Новизна: получены штаммы микроорганизмов продуцирующие внеклеточные петли рецептора GPR161 человека.

Полученные штаммы микроорганизмов продуцировали рекомбинантные внеклеточные петли рецептора GPR161 человека в высоких концентрациях.

Проект на стадии разработки.

Эффективность разработки определяется высокими продуктивными характеристиками полученных штамм-продуцентов.

Медицина

Штаммы гибридных клеток, продуцирующих моноклональные антитела против GPR161 рецептора клеток маркера метастазирования рака молочной железы.

Получение штаммов гибридных клеток, продуцирующих моноклональные антитела против внеклеточных петель рецептора GPR161 человека.

Гибридомная технология, иммунологические, биохимические и биотехнологические методы.

. rGPR161 белок формировал у мышей титр антител до 1:6400 и реагировал с сыворотками к GPR161. МС/МС спектрометрия показала полное соответсвтие белка рецептору GPR161. Получены 3 штамма гибридных клеток H3D8, F10G7, C1G8 продуцирующие моноклональные антитела к рекомбинантному GPR161 белку. Продуктивность клеток in vitro 25 мкг/мл, в условиях in vivo 8 мг/мл. Клетки культивируют в матрацах со средой RPMI –1640 при 37оС, в 5% концентрации СО2. Частота пассирования через 3-4 суток, характер роста – стационарная суспензия, жизнеспособность клеток составляет 60%. Отработан метод выделения и очистки моноклональных антител. Опубликована одна статья в журнале с ненулевым импакт фактором, одна принята к публикации в журнале индексируемая в базе данных Scopus и подана одна заявка на патент. Новизна результатов: впервые в Республике Казахстан получены штаммы гибридных клеток, продуцирующие моноклональные антитела к рецептору GPR161 человека.

Гибридные клетки, продуцирующие моноклональные антитела к рецептору GPR161, обладают выгодными технологическими и высокими продуктивными свойствами.

Проект на стадии разработки.

Эффективность разработки определяется высокими продуктивными характеристиками полученных штаммов гибридных клеток.

Медицина.

Объектом исследования являются штаммы гибридных клеток, продуцирующих моноклональные антитела против GPR161 рецептора клеток маркера метастазирования рака молочной железы.

Целью проекта в 2020 году является определение иммунохимических, иммунобиологических и диагностических характеристик моноклональных антител против рекомбинантного рецептора GPR161.

В процессе работы использовались методы гибридомной технологии, а также культуральные, иммунологические, биохимические и биотехнологические методы исследования.

В результате исследований получены штаммы микроорганизмов E.coli BL21/pET28/GPR161.1, BL21/pET28/GPR161.2, BL21/pET28/GPR161.3 продуцирующие рекомбинантные внеклеточные петли рецептора GPR161. МС/МС спектрометрия белка показала совпадение с белком GPR161 представленной в международных базах данных. Получены 4 штамма гибридных клеток H3D8, F10G7, C1G8, В2С3 продуцирующие моноклональные антитела против рекомбинантного GPR161 белка. Получены препараты моноклональных антител против рекомбинантного GPR161. Моноклональные антитела относятся к иммуноглобулинам класса G1. Константа связывания моноклональных антител составила от 2х106М-1 до 4х107М-1. Опубликованы 2 статьи в журналах рекомендованных КОКСОН, 2 статьи в журналах, индексируемых Scopus, получен патент на изобретение и подана одна заявка на патент. Новизна результатов: в Республике Казахстан получены моноклональные антитела к рецептору GPR161 человека.

Основные конструктивные и технико-эксплуатационные показатели: специфичность и чувствительность моноклональных антител к рецептору GPR161 и обладают выгодными технологическими свойствами.

Не внедрено.

Эффективность разработки определяются иммунохимическими, иммунобиологическими и диагностическими свойствами моноклональных антител против GPR161 рецептора.

Медицина