Объектом исследования являлись биологические образцы от диких птиц водного и околоводного комплексов, изоляты парамиксовирусов, выделенные в Республике Казахстан.

Цель проекта - изучение молекулярной эволюции, особенностей циркуляции парамиксовирусы диких птиц, и подбор оптимальных кандидатов для разработки диагностических тест-систем.

Вирусологические, серологические, молекулярно-биологические (секвенирование по Сенгеру, биоинформационный анализ, BLAST-анализ, филогенез)

Проведена инвентаризация 28 гемагглютинирующих агентов, выделенных в 2006-2016 гг., от птиц водного и околоводного, наземных комплексов и проведены их восстановительные пассажи. Собраны 270 биологических образцов для вирусологического исследования во время весеннего и осеннего перелетов в различных регионах РК от 200 особей 16 видов диких птиц в виде клоакальных и трахеальных смывов. Осуществлен скрининг обратной транскрипции полимеразно-цепной реакции (ОТ-ПЦР) 270 биопроб от диких птиц, собранных в 2018 г., в результате которого положительными оказались клоакальные смывы от трех особей джека, отловленные в Балхаш-Алакольской впадине, и одной деревенской ласточки, отловленной на побережье Каспия. Идентификация 28 гемагглютинирующих агентов (ГАА), выделенных в 2006-2016 гг., от птиц водного и околоводного комплексов в Центральном Казахстане в ПЦР с праймерами к консервативному участку L-гена, позволила отнести 28 агенты к парамиксовирусам птиц.

---

Результаты исследований могут быть использованы практическими учреждениями ветеринарного контроля Республики Казахстан при расшифровке вспышек заболеваемости и контроле возникающих чрезвычайных эпидемических ситуаций.

Проект направлен на получение новых знаний о ПМВ птиц, определении особенностей эволюции этих возбудителей в орнитофауне, и степени филогенетического родства представителей современных и ранее идентифицированных серотипов. Экономический эффект определяются возможностью контроля за эпизоотическими ситуациями. Будут изучены и паспортизованы генетические и биологические свойства новых изолятов ПМВ, отобраны оптимальные кандидаты для разработки диагностических тест-систем.

Область применения – вирусология, молекулярная биология, ветеринария

Объектом исследования являлись биологические образцы от диких птиц водного и околоводного комплексов, изоляты парамиксовирусов, выделенные от них в Республике Казахстан.

Цель проекта - изучение молекулярной эволюции, особенностей циркуляции парамиксовирусов диких птиц, и подбор оптимальных кандидатов для разработки диагностических тест-систем.

Вирусологические, серологические, молекулярно-биологические и электронно-микроскопические методы исследования

Осуществлен скрининг в обратной транскрипции полимеразно-цепной реакции (ОТ-ПЦР) 364 биопроб от диких птиц, собранных на территории Казахстана c октября 2018 г. по август 2019 г., в результате которого положительными оказались клоакальные смывы, полученные на побережье Каспия в октябре 2018 г. (три образца) и на озере Сорбулак в феврале 2019 г. (четыре смыва). При заражении куриных эмбрионов ПЦР-положительными образцами изолировано семь агентов с титрами в РГА 1:64-1:256 и все они идентифицированы как парамиксовирусы. Идентификация 77 гемагглютинирующих агентов, выделенных в 2006-2019 гг., от птиц водного и околоводного комплексов в ПЦР с праймерами к консервативному участку L-гена, позволила отнести все агенты к парамиксовирусам птиц. Секвенирование фрагмента L-гена 40 изолятов птиц 2006-2019 гг. выделений и последующий BLAST-анализ показал принадлежность 30 изолятов к серотипам ПМВ-1, 10 к ПМВ-4, один к ПМВ-6, три штамма отнесены к недавно открытому серотипу ПМВ-16, два к ПМВ-20. Электронная микроскопия парамиксовируса нового 20-го серотипа выявила сходства тонкой структурной организации вирионов с другими ПМВ. Вирионы содержали суперкапсид (10-15 нм) покрытый шипами длиной 8-12 нм и диаметром 5,0 нм, полые тяжи нуклеокапсида со спиральным типом симметрии. Диаметр нуклеокапсида состовлял 18 нм, шаг спирали нуклеокапсида не превышал 5 нм.

Настоящий проект является логическим продолжением ранее проведенных НИР, и будет осуществляться на более высоком научно-методическом уровне с использованием последних молекулярно-генетических методов. Он соответствует современному тренду, заключающемуся в сравнительном исследовании филогенеза и структурных белков инфекционных патогенов с целью определения их потенциальной опасности и особенностей эволюционной изменчивости.

Область применения – вирусология, молекулярная биология, ветеринария.

Объектом исследования являлись биологические образцы от диких птиц водного и околоводного комплексов, изоляты парамиксовирусов, выделенные от них в Республике Казахстан.

Цель проекта – изучение молекулярной эволюции, особенностей циркуляции парамиксовирусов диких птиц, и подбор оптимальных кандидатов для разработки диагностических тест-систем.

вирусологические, молекулярно-генетические, серологические

Результаты работы и их новизна. Для вирусологических исследований собраны 624 биологические образцы в виде трахеальных и клоакальных смывов от 489 особей 37 видов диких птиц. В результате проведенных вирусологических, молекулярно-генетических и серологических исследований, получены данные о циркуляции в Казахстане ПМВ птиц серотипов APMV-1, APMV-4, APMV-6, APMV-16 и APMV-20.

Получены полные нуклеотидные последовательности всех шести генов изолятов APMV-20/черноголовый хохотун/Атырау/5541/2013 и APMV-20/озерная чайка/Балхаш /5844/2013. Установлен следующий порядок их очередности: 3’-NP-P/V/W-M-F-HN-L-5’, кодирующий восемь белков: NP (459 аминокислотных остатка (aо), P – 431 a.о.; V – 263a.о.; W – 165 a.о.; M – 376 a.о.; F – 537 a.о.; HN – 574 a.о. и L – 2242 a.о., что соответствует размерам генов референсного вируса APMV-20/чайка/Актау/5976/2014. Получены патенты на штаммы: APMV-13/белолобый гусь/СКО/5751/13 (Патент № 32593); APMV-8/лебедь-кликун/СКО/5767/2013 (Патент №33988), используемый для приготовления диагностических препаратов.

Рекомендации по внедрению или итоги внедрения результатов НИР. Результаты исследований могут быть использованы практическими учреждениями ветеринарного контроля Республики Казахстан при расшифровке вспышек заболеваемости и контроле возникающих чрезвычайных эпидемических ситуаций.

Область применения – вирусология, молекулярная биология, ветеринария.