ОБЩИЕ СВЕДЕНИЯ
ИРНAP05133470, Номер госрегистрации0118РК00932
НаименованиеСоздание штамма-продуцента и разработка технологии получение рекомбинантного верблюжьего сычужного фермента, востребованного на предприятиях молочной промышленности
Приоритетное направлениеРациональное использование природных ресурсов, в том числе водных ресурсов, геология, переработка, новые материалы и технологии, безопасные изделия и конструкции
Вид исследованияПрикладное
ЗаявительРеспубликанское государственное предприятие на праве хозяйственного ведения "Национальный центр биотехнологии"
Научный руководительХасенов Бекболат Бауржанович
Балл ГНТЭ32
Общая одобренная сумма39260000
Решение ННС
Ожидаемые результаты
Будет получен ген химозина Camelus dromedarius. Ген будет клонирован в промежуточные вектора с целью сиквенсного анализа, наработки и хранения. Будет создана генно-инженерная конструкция для экспрессии гена химозина Camelus dromedarius в клетках микроорганизмов. Экспериментально будет подтверждено отсутствие делеций, вставок и мутаций. Будут получены генно-модифицированные штаммы-продуценты рекомбинантных верблюжьих химозинов C.bactrianus и C.dromedarius. Будут изучены автокаталитическая и протеолитическая активности, определен температурный и рН оптимум и исследовано влияние ионов металлов на коагуляционную активность верблюжьих химозинов. Будет проведен сравнительный анализ двух химозинов, оптимизированы условия культивирования штамма-продуцента в биореакторе-ферментере и разработана технология получения биопрепарата на основе рекомбинантного верблюжьего сычужного фермента.
Реферат (Абстракт) - 2018 год
Объект исследования, разработки или проектирования
Верблюжий сычужный фермент
Цель работы
Определение биохимических свойств химозина из C.bactrianus и C.dromedarius с последующим получением штамма-продуцента верблюжьего сычужного фермента
Методы исследования
Методы молекулярной биологии, генетической инженерии, биохимии и биотехнологии
Полученные результаты и новизна
Получен дрожжевой штамм-продуцент эффективно экспрессирующий ген химозина C.bactrianus. Установлено, что из 8 протестированных питательных сред для продукции рекомбинантного химозина C.bactrianus наиболее оптимальной является среда, содержащая 1% дрожжевой экстракт, 2% пептон, 3% глюкоза, 100 мМ цитрат-фосфатный буфер рН 4.0, 10 мМ аскорбиновая кислота, 5% сорбитол, 10 г/л свекловичной мелассы. Проведена очистка рекомбинантного химозина. Изучено влияние значения рН в диапазоне от 4,5 до 8,0 на активность рекомбинантного химозина C.bactrianus. Установлено, что максимальная активность достигается при температуре 45°С-50°С. Изучено влияние ионов металлов в составе солей CaCl2, KCl, NaCl, MgCl2, FeCl3, LiCl2, MnCl2, NiCl2, BaCl2, CoCl2, ZnCl2 на ферментативную активность рекомбинантного химозина. Новизна работы заключается в том, что впервые изучен сычужный фермент двугорбого верблюда C.bactrianus.
Основные конструктивные и технико экономические показатели
Создан штамм-продуцент рекомбинантного сычужного фермента двугорбого верблюда
Степень внедрения
Не внедрено
Эффективность
Высокая
Область применения
Биотехнология
Реферат (Абстракт) - 2019 год
Объект исследования, разработки или проектирования
Объектом исследований является верблюжий сычужный фермент
Цель работы
Определение биохимических свойств химозина из C.bactrianus и C.dromedarius с последующим получением штамма-продуцента верблюжьего сычужного фермента
Методы исследования
Методы молекулярной биологии, генетической инженерии, биохимии и биотехнологии
Полученные результаты и новизна
В результате получен дрожжевой штамм-продуцент эффективно экспрессирующий ген химозина C.dromedarius с удельной молокосвертывающей активностью 457 ед/мг. Методами тангенциальной ультрафильтрацией и хроматографической очистки на сорбентах DEAE Sepharose FastFlow, SP-Sepharose, Q-Sepharose проведена очистка рекомбинантного химозина одногорбого верблюда C.dromedarius в количестве 1112 мкг из 500 мл культуры дрожжевого штамма-продуцента. Изучено влияние значения рН в диапазоне от 4,5 до 8,0 на активность рекомбинантного химозина C.dromedarius. Установлено, что в диапазоне рН до 6,5 активность фермента не падает ниже 50% от максимальной. Установлено, что максимальная активность достигается при температуре +48°С ± 2°С °С. Изучено влияние ионов металлов в составе солей FeCl3, LiCl2, MnCl2, NiCl2, BaCl2, CoCl2, ZnCl2, MgCl2, CaCl2, KCl, NaCl на ферментативную активность рекомбинантного химозина одногорбого верблюда C.dromedarius. Установлено, что для полноценной и стабильной работы фермента необходимо поддерживать концентрацию CaCl2 на уровне 40±15 мМ.
Новизна работы заключается в том, что изучен сычужный фермент одногорбого верблюда C. dromedarius
Основные конструктивные и технико экономические показатели
Создан штамм-продуцент рекомбинантного химозина С.dromedarius
Область применения
Биотехнология
Реферат (Абстракт) - 2020 год
Объект исследования, разработки или проектирования
Объектом исследований является верблюжий сычужный фермент.
Цель работы
Цель работы – определение биохимических свойств химозина из C.bactrianus и C.dromedarius с последующим получением штамма-продуцента верблюжьего сычужного фермента.
Методы исследования
Методы проведения работы – использовались методы молекулярной биологии, генетической инженерии, биохимии и биотехнологии.
Полученные результаты и новизна
В результате получены рекомбинантные химозины C. bactrianus и C. dromedarius. Определена их активность, исследована зависимость от рН, температуры, концентрации CaCl2, ионов металлов. В качестве основы для препарата выбран рекомбинантный химозин двугорбого верблюда C. bactrianus. Подобраны условия для культивирования дрожжевого штамма-продуцента рекомбинантного верблюжьего химозина, выделении и лиофиллизации препарата. Проведены тестовые испытания рекомбинантного верблюжьего химозина на получение мягкого и полутвердого видов сыра и творога. Разработан и утвержден лабораторный регламент на получение рекомбинантного верблюжьего химозина.
Основные конструктивные и технико экономические показатели
Впервые получен и изучен химозин двугорбого верблюда Camelus bactrianus.
Область применения
Область применения – биотехнология.