Объектом исследований является вирус оспы овец Capripoxvirus

Целью исследований являлось конструирование рекомбинантных штаммов вируса оспы овец, экспрессирующих протективные антигены Brucella spp., и изучение их иммунобиологических свойств.

При выполнении исследований использованы современные методы молекулярной биологии, генетической инженерии, вирусологии и иммунологии.

В результате исследований сконструированы плазмиды интеграции pIN-TK-omp16, pIN-TK-omp19, pIN-TK-SOD, pIN-TK-L7/L12, pIN-TK-IalB, и pIN-TK-omp19&SOD, позволяющие встроить в геном вируса оспы овец гены Brucella spp., кодирующих белки omp16, omp19, SOD, L7/L12. Плазмиды наработаны в препаративном количестве, проведена оценка качества полученных конструкций. На все конструкции составлены паспорта. Для получения рекомбинантных штаммов проведена трансфекция плазмид интеграции в инфицированную вирусом оспы овец культуру клеток тестикулы ягненка. Проведены пассажи клеточных лизатов после трансфекции в селективных условиях. Установлено наличие транзиентной экспрессии в поксвирусной системе генов L7/L12, IalB, SOD и omp16.

Запланированные на отчетный период работы выполнены в полном объеме.

Область применения – медицинская /ветеринарная вирусология

Объектом исследований является вирус оспы овец Capripoxvirus.

Цель исследований – конструирование рекомбинантных штаммов вируса оспы овец, экспрессирующих протективные антигены Brucella spp., и изучение их иммунобиологических свойств.

При выполнении научно-исследовательских работ использованы современные методы молекулярной биологии, генетической инженерии, вирусологии и иммунологии.

В результате получено семь рекомбинантных вирусов оспы овец со встройкой в локусе тимидинкиназы одного из целевых генов Brucella spp., кодирующих белки omp16, omp19, omp25, SOD, L7/L12, IalB или химерный ген omp19/sodC. Наличие целевого гена в вирусном геноме подтверждено методом ПЦР. Для двух рекомбинантных вирусов SPPV(TK-)omp19 и SPPV(TK-)omp19/sodC проведены исследования по определению стабильности. Методом последовательного пассирования в культуре клеток тестикул ягненка установлено, что рекомбинанты сохраняют генетическую стабильность в течение пяти пассажей (срок наблюдения). Рекомбинантные вирусы SPPV(TK-)omp19 и SPPV(TK-)omp19/sodC депонированы в Коллекции микроорганизмов НИИПББ КН МОН РК. Установлено наличие транзиентной экспрессии в поксвирусной системе гена omp19. Для изучения экспрессии целевых генов рекомбинантными вирусами получены очищенные препараты бактериально-экспрессированных белков omp16, omp19, omp25, SOD, L7/L12, IalB и специфические сыворотки к ним на мышах.

Генетически стабильные рекомбинантные штаммы вируса оспы овец экспрессирующие гены бруцеллы

Область применения – медицинская /ветеринарная вирусология.

Объектом исследований является вирус оспы овец Capripoxvirus.

Цель работы – конструирование рекомбинантных вирусов оспы овец, экспрессирующих протективные антигены Brucella spp., и изучение их иммунобиологических свойств

Для рекомбинации генома каприпоксвируса был использован метод гомологичной рекомбинации. Отбор рекомбинантных вирусов осуществляли в условиях временной доминантной селекции.

В результате исследований сконструированы семь плазмид интеграции pIN-TK-omp16, pIN-TK-omp19, pIN-TK-omp25, pIN-TK-SOD, pIN-TK-L7/L12, pIN-TK-IalB, и pIN-TK-omp19&SOD для встраивания в геном вируса оспы овец шести генов, кодирующих антигенные белки Brucella spp. На все конструкции составлены паспорта. Получено семь рекомбинантных вирусов оспы овец rSPPV(TK-)L7/L12, rSPPV(TK-)omp16, rSPPV(TK-)omp19, rSPPV(TK-)omp25, rSPPV(TK-)IalB, rSPPV(TK-)sodС, rSPPV(TK-)omp19/sodC, в геном которых встроены гены, кодирующие белки Brucella spp. Все рекомбинанты за исключением rSPPV(TK-)L7/L12 оставались генетически стабильными при длительном пассировании в культуре клеток и эффективно экспрессировали встроенные гены как в пермиссивных так и в непермиссивных клетках. Иммунизация мышей рекомбинантными вирусами индуцирует как гуморальный, так и клеточный иммунный ответ. Уровень выработки антител зависел от используемого антигена и усиливался при использовании гетерологичной прайм-бустер иммунизации. Стимуляция спленоцитов иммунизированных мышей антигенами бруцелл приводила к синтезу интерферона-гамма. Иммунизация мышей рекомбинантными вирусами обеспечивала существенное снижение обсеменённости селезенки после контрольного заражения вирулентным штаммом 544 B. abortus, сопоставимое с вакцинным штаммом S19 B. abortus.

Значимость работы – рекомбинантные каприпоксвирусы, экспрессирующие антигенные белки бруцелл являются перспективными кандидатами для разработки безопасной вакцины против бруцеллёза.

Область применения – медицинская/ветеринарная вирусология.